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利用蔡司 LSM 880 NLO 快速获取多光子 FLIM

我们展示了结合蔡司 LSM 880 NLO 多光子激光扫描显微镜的 bh FASTAC(快速采集)FLIM 系统的性能。FASTAC系统使用单个快速混合探测器,其光子脉冲被分配到四个并行的TCSPC FLIM通道中,参见bh news 2018/04。由于每个新光子都会进入下一个 TCSPC 模块,因此该原理大大减少了计数损失和堆积效应。图像可在蔡司 LSM 880 的最短帧时间内采集记录。重要的是,该系统在时间分辨率、时间通道宽度、时间通道数量或像素数量方面没有任何妥协。使用快速探测器时,IRF 宽度小于 25 ps FWHM,每个像素记录的图像通常有 1024 个时间通道。需要注意的是,只有当样品能够为系统提供足够高的光子速率时,才能实现快速采集。对于含有大量高亮度荧光团的样品来说就是如此。在分子成像实验、代谢 FLIM、FRET 实验或荧光团与细胞内高度特异性目标相连的其他应用中,情况并非总是如此。FASTAC 系统的优势在于,即使在这种样本有限的条件下,其结果也至少与标准 bh FLIM 系统一样好。

应用说明:使用蔡司 LSM 880 NLO 的快速采集多光子 FLIM

左图:BPAE 样品的 FLIM,1024x1024 像素,每个像素 1024 个时间通道。采集时间为 10 秒。右图Convallaria 样品,512 x 512 像素,1024 个时间通道。采集时间 0.6 秒。

7 8 月, 2024

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