Becker & Hickl FLIM 系统采用 FLIM / PLIM 组合技术,可同时记录细胞和组织中氧浓度和 NAD(P)H 未结合/结合率的图像。氧浓度来自磷光染料的发光寿命,非结合/结合比来自 NAD(P)H 双指数荧光衰减的振幅。FLIM/PLIM 技术的基础是使用高频脉冲激光进行扫描,该激光的开/关调制周期在微秒范围内,与扫描像素同步。信号由 bh 的多维 TCSPC 流程记录。FLIM 通过建立激光脉冲周期和扫描坐标中光子时间的光子分布来获得,PLIM 通过建立激光调制周期和扫描坐标中光子时间的光子分布来获得。该技术可同时记录 FLIM 和 PLIM,避免了通过脉冲选择器降低激光脉冲重复率,也无需使用高脉冲能量进行磷光激发。与每个磷光激发周期只使用一个激光脉冲的技术相比,它的 PLIM 灵敏度要高得多,避免了 FLIM 记录中的堆积问题,而且与双光子激发完全兼容。 用六水(2,2′-联吡啶)二氯化钌(II)染色的 SCC-4 细胞的 FLIM 和 PLIM 图像。左图为 FLIM,右图为 PLIM。配备 bh Simple-Tau 152 FLIM/PLIM 系统的 Zeiss LSM 780 NLO,双光子激发波长 750 nm。bh SPCImage 进行数据分析。
更多信息,请参阅应用说明“通过多维 TCSPC 和多脉冲激发同时进行磷光和荧光寿命成像“。
S.Kalinina, V. Shcheslavskiy, W. Becker, J. Breymayer, P. Schäfer, A. Rück, Correlative NAD(P)H-FLIM and oxygen sensing-PLIM for metabolic mapping.J. Biophotonics (2016)