用于 Zeiss LSM 710 / 780 / 880 / 980 的 FLIM 系统

  • 两个完全并行的 TCSPC FLIM 通道
  • 通过 TCP 与蔡司 ZEN 软件集成,用于 LSM 980
  • 共焦和/或多光子 NDD FLIM
  • 通过两个 bh 的多维 TCSPC 技术进行记录
  • 两个HPM-100-40 GaAsP 混合探测器
  • 可选:HPM-100-06 混合探测器,IRF 宽度 <20 ps FWHM
  • 可选:HPM-100-50 混合探测器,用于近红外 FLIM
  • 可选多波长FLIM
  • 卓越的时间分辨率:电 IRF 宽度 3.5 ps FWHM
  • 出色的定时稳定性 - 无需记录 IRF
  • 时间通道宽度低至 405 fs
  • 百万像素 FLIM,高达 2048 x 2048 像素,256 个时间通道
  • 同步 FLIM / PLIM
  • 检测波长范围从 360 纳米到 900 纳米
  • 由 Ti:Sa 激光器、OPO 或bh ps 二极管激光器激发
  • 用于多光子 FLIM 和共焦 FLIM 的相同系统
  • 探测器可在 NDD 端口和共焦端口之间互换
  • 系统模块化:可添加更多 FLIM 通道
  • 通过 bhSPCImage NG进行数据分析
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说明

从入门级到高级分子成像应用的 FLIM 系统

Becker & Hickl FLIM 与蔡司 ZEN 软件的全新集成使您获益匪浅,同时还能享受无与伦比的用户友好性和最高性能!

对于蔡司 LSM 980,我们隆重推出全新的 bh SPCConnect 软件。它通过 TCP(传输控制协议)将 bhSPCM 软件和 Zeiss ZEN 软件结合在一起。这意味着 SPCM 与 ZEN 同时运行,两个软件组件可自由交换命令、系统参数和数据。SPCM 可完全在后台运行,即 ZEN 用户甚至无需注意 bh SPCM 软件的运行。

这种独特的集成使用户不仅能执行基本的 FLIM 实验,还能执行复杂的测量程序,如自动 Z 叠记录、快速时间序列记录、快速触发累积等。

FLIM 图像(第一矩法)直接显示在 ZEN 中,并可在 ZEN 之外进一步处理。精确的数据分析工具,包括拟合程序等,也可直接从 Zen 中启动:由 GPU 驱动的SPCImage NG软件。该软件可执行单衰变、双衰变和三衰变分析,并直接提供寿命、成分振幅以及代谢比率、FLIRR、FRET 效率和 FRET 距离等生物相关参数。SPCImage 可在 GPU 上运行,即使图像大小在百万像素范围内,也能在数秒内提供 FLIM 结果。凭借这些功能,新型 FLIM 系统非常适合于从入门级 FLIM 到高端多维分子成像的各种应用。

Becker & Hickl 公司自 2000 年以来一直为蔡司 LSM 系列激光扫描显微镜生产 FLIM 系统。从 LSM 510 开始,为 LSM 710、LSM 780、LSM 880 和 LSM 980 提供 FLIM 系统。所有系统都基于 bh 的多维 TCSPC 技术,具有接近理想的光子效率、超高的时间分辨率、出色的空间分辨率和深度分辨能力、多指数衰减能力和较短的采集时间。

bh 公司最近升级了用于蔡司 LSM 980 的 FLIM 系统,配备了新的 TCSPC / FLIM 模块和新软件。标准系统有两个并行超快速记录通道,还可根据需要增加其他通道。使用新型SPC-180NX TCSPC FLIM模块和超快HPM-100 混合探测器,可获得小于 20 ps FWHM(8 ps RMS)的 IRF 宽度。因此,该系统能够分辨出寿命小于 10 ps 的衰变成分。FLIM 系统既可用于多光子显微镜,也可用于共聚焦显微镜。多光子显微镜使用非扫描检测,可从生物组织深层获得清晰图像。共焦系统将探测器连接到扫描仪的光学输出端,使用 LSM 980 的全系列滤光片和针孔选择功能。两种版本的探测器都是兼容的,可以在显微镜的输出端口之间互换。或者,也可以将探测器同时连接到共焦端口和 NDD 端口,并通过软件命令激活。

新型 bh / 蔡司 FLIM 系统可与 bh 的新型集成 SPCConnect 软件一起使用。它在 TCP(传输控制协议)级别上将bh SPCM 软件和蔡司 ZEN 软件结合在一起。实际上,这意味着 SPCM 在 ZEN 框架内运行,两个软件组件可自由交换命令、系统参数和数据。与 DLL 层面的集成相比,TCP 集成的优势在于,除了基本的 FLIM 外,还提供 Z-Stack 记录、时间序列记录、快速触发累积、FLITS 和同步 FLIM / PLIM 等功能。此外,用户还可以立即对两边的功能进行升级。

数据分析由bh 的传奇软件 SPCImage NG 数据分析软件执行。该软件可进行单衰变、双衰变和三衰变分析,并直接提供寿命、成分振幅以及代谢比率、FLIRR、FRET 效率和 FRET 距离等生物相关参数。SPCImage NG 可在 GPU 上运行,即使是百万像素的图像,也能在几秒钟内得出 FLIM 结果。凭借这些功能,新型 FLIM 系统非常适合于从入门级 FLIM 到高端多维分子成像的各种应用。

详情请参见 350 页的用户手册 "用于蔡司 LSM 710/780/880 激光扫描显微镜的模块化 FLIM 系统"和"用于 LSM 980 显微镜的手册增编"。

规格

选定规格

原理

通过 bh 的多维 TCSPC 技术进行 TCSPC FLIM,集成在 Zeiss ZEN 中

寿命测量

时域单光子计数

激发

NLO 系统:近红外fs脉冲激光器

共焦系统:bh ps 脉冲二极管激光器

扫描速率

支持整个 LSM 980 扫描速度范围

一般操作模式

TCSPC FLIM:

  • 2 个(多)光谱或偏振通道
  • 时间序列、Z-堆栈、瓦片以及它们的组合
  • 光子相关FCS、FCCS、门控 FCS
  • 单点荧光和磷光衰减* *需要 ZEN 点扫描

*需要 ZEN 光斑扫描模块

TCSPC 系统

TCSPC / FLIM 模块

SPC-180NX

SPC-QC-104

并行 TCSPC / FLIM 通道数

典型值2

典型值2

电子时间分辨率

1.5 ps RMS / 3.5 ps FWHM

16 ps RMS / <39 ps FWHM

定时精度 /

1.1 ps

11 ps

最小时间通道宽度

405 fs

4 ps

饱和计数率

12 MHz

40 MHz,活动通道共享。

激光复用同步

最多 4 个激光波长

记录多波长数据

通过路由功能在 16 个通道中同时进行

实验触发功能

TTL,在未集成 ZEN 软件的系统上用于 Z-Stack FLIM 和显微镜控制时间序列

软件

数据采集软件

bh SPCM,嵌入在用于 LSM 980 的蔡司 ZEN 3.9+ 软件中

操作系统

Windows 10 / 11 64 位

数据分析软件

bh SPCImage NG

数据分析原理

使用 GPU 处理的 MLE

函数模型

  • IRF 卷积单、双或三分量指数衰减
  • 可选择考虑不完全衰减
  • 偏移分量模型

IRF 建模

拟合衰变数据的合成 IRF 函数、从数据中自动提取 IRF 或测量 IRF

分析管道

在重复测量条件下自动进行 FLIM 拟合分析的分析管道

激发源

用于共焦 FLIM

1 - 4 bh ps 脉冲二极管激光器

可用波长

405 纳米至 785 纳米

重复率

20、50、80 MHz 和连续波

脉冲宽度

40 ps 至 100 ps

用于多光子 FLIM

蔡司 LSM NLO 系统的 Ti:Sa 激光器

探测器

NDD 探测器

直接耦合到 LSM NDD 端口

共焦检测器

直接耦合到 LSM 共焦端口

标准探测器

HPM-100-40 混合探测器,带 GaAsP 阴极,250 至 720 nm,最适合与 ns 寿命染料一起使用

可选项

HPM-100-06 探测器,<20 ps FWHM IRF 宽度,220 至 650 nm,最适合用于 ps 自发荧光寿命样品

可选

HPM-100-50 检测器,400 至 900 nm,最适合长波长荧光

可选

MW-FLIM GaAsP 多波长探测器(仅限共焦操作)

下载

文件

The bh TCSPC Handbook
10th edition, September 2023

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bh FLIM 系统的应用领域是分子成像。典型的应用包括离子浓度、pH 值或局部粘度成像,通过 FRET 进行蛋白质相互作用实验,以及通过 NADH 和 FAD 的荧光衰减结合氧气测量进行代谢成像。在这些应用中,bh FLIM 系统具有高灵敏度、高时间分辨率、高定时稳定性,并能将多指数衰减曲线分解为各个组成部分。其他优势还包括能够记录毫秒级的快速生理效应 FLIM,以及同时记录多个激发和发射波长。

用于 Zeisss LSM 的 bh FLIM 系统的基本功能

  • 从入门级 FLIM 到高端多维分子成像功能
  • 多光子 FLIM
  • 共焦 FLIM
  • 1 到 4 个波长通道的并行记录
  • 两个激发波长的复用记录
  • 16 个波长通道的多波长 FLIM
  • 多光子多光谱 NDD FLIM
  • 通过可选的 FASTAC FLIM 系统实现快速采集 FLIM
  • 可用 bh Express FLIM 技术实现快速 FLIM
  • 近红外 FLIM
  • 时间序列 FLIM:快速时间序列或显微镜控制时间序列
  • Z 叠加 FLIM
  • 空间镶嵌 FLIM
  • 生理效应的时间镶嵌 FLIM,每幅图像可低至 40 毫秒
  • FLITS:在线性扫描中记录瞬时寿命效应,分辨率低至 1 毫秒
  • 与 FLIM 同时进行的 PLIM(磷光寿命成像
  • 快速预览模式
  • 在仪器配置和操作模式之间轻松切换
  • 以 LSM 的任何扫描速率运行
  • 高分辨率图像,高达 2048 x 2048 像素
  • FCS 和 Cross-FCS,由于使用混合探测器,因此无后脉冲

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